jueves, 27 de febrero de 2014

Cómo preparar un tampón fosfato potásico

Últimamente en mis experimentos he cambiado de cultivo. Antes me centraba en tomate, maíz, alubia, lechuga, soja y puntualmente, tabaco. En estas plantas he llevado a cabo mis investigaciones en los últimos años pero ahora, he añadido un cultivo más para mí totalmente nuevo: el arroz.

Planta de arroz | FUENTE

Esta novedad supone modificar algún que otro protocolo porque a la vista de los resultados, el arroz (mira que me gusta... comérmelo!) me está dando algún problema y no se somete a mis métodos analíticos. A esto, hay que sumar que muchas determinaciones que antes se hacían con un espectrofotómetro ahora se hacen con otro tipo de tecnología mucho más moderna, fiable y rápida, y frecuentemente hay que estar cambiando las formas de hacer las cosas. Es decir, optimizando los métodos y protocolos. Por ejemplo, donde antes usábamos 100 microlitros de muestra, ahora es suficiente con 5. 


Infinite(R) 200 PRO NanoQuant microplate reader. Es decir, una maravilla
de máquina que lo lee todo en un minuto y te quita horas de trabajo.


Tengo la buena o mala costumbre de revisar todos los cálculos y unidades de los protocolos, incluso si lo he hecho yo. Por un lado, me sirve para comprobar que a mí me sale igual (si el protocolo no es mío) y por otro, para no olvidar problemas de química básica. Sin embargo en ocasiones, compruebo que algún cálculo está mal y rápidamente se corrige explicándole al autor dónde está el fallo y por qué. 

Un tampón, buffer, solución amortiguadora o solución reguladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un ácido débil y su base conjugada, es decir, sales hidrolíticamente activas. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolución frente a la adición de cantidades relativamente pequeñas de ácidos o bases fuertes. Este hecho es de vital importancia, ya que con un leve cambio en la concentración de protones (H+) en la célula se puede producir un paro en la actividad de las enzimas. 

Este post no es más que una pequeña ayuda por si os viene bien para aquellos que en algún momento tengáis que preparar tampón fosfato potásico (abreviado, PK) a una concentración X y un pH determinado. Directamente os pongo "mi chuleta" de hace 12 años y que en un plástico ya viejuno, la voy sacando cada vez que tengo que preparar un buffer. 

Hay tablas por internet y en los manuales donde se prepara el tampón partiendo de dos soluciones (1 y 2) y añadiendo la sol. 2 a la 1. Es igual de válida. 

NOTA: Los cálculos están hechos para una molaridad de 1 y un pH de 7 pero el desarrollo es el mismo con otra molaridad y otro pH siempre que respetemos que la unidad es Molar (moles/litro) y el volumen para el que da los datos es 1 litro. Es decir, si queremos un tampón PK 50 mM, pondremos 0.05 M.



Click para ampliar. 


Y dejadme que os dé un consejo aplicable al trabajo: Nunca, nunca, deis algo como bueno sin repasarlo y confirmar que está bien antes de ponerlo en práctica. Haciendo las cosas bien ahorraréis dinero, tiempo y disgustos. Es vuestro trabajo.

PD: Perdonad la letra y la falta de alguna unidad. Me resultaba más cómodo subir la foto que escribir aquí ecuaciones. 

92 comentarios:

  1. Muchas gracias por la chuleta y sobre todo por el consejo.

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  2. Si se prepara el tampon y tiene un pH inferior a 7 se puede ajustar con NaOH?

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    1. Acabo de ver tu comentario Anónimo, disculpa. Se me había pasado!

      A ver, un tampón o buffer no es lo mismo que una solución que tengas que preparar a un pH determinado. No se prepara únicamente haciendo los cálculos del peso del reactivo y modificando el pH con una base o un ácido para subirlo o bajarlo, como ocurre con el EDTA 0.5M pH 8 o el MOPS.
      Requiere un cálculo diferente. Es una solución amortiguadora y además del pH, tiene pKa que hay que considerar para que la ecuación esté en equilibrio.

      Por tanto, y respondiendo a tu pregunta, si preparas el tampón como debes hacerlo, no será necesario ajustar el pH a nada. Ya está el cálculo hecho como para que añadiendo los gramos y el volumen de agua necesario, el pH sea el que tiene que ser ;-)

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    2. Pues te cuento que no es tan así como tu lo relacionas aquí, pues al mezclar las cantidades que relacionas me pasa lo mismo, no obtengo el pH deseado. Además, si tu proporción de agente ácido es más grande que la de agente básico, tu pH tenderá a bajar por los principios del equilibrio químico.

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    3. Hola Camilo.
      Como digo en el post, esta es una de las formas. La otra, es preparar las soluciones por separado en base a los datos que ofrecen algunas tablas en libros y manuales (en función del pKa y el pH) y añadir una solución en otra. Vamos, mezclarlas.

      Si no tienes el pH deseado (depende de cuál te salga y lo grande que sea la diferencia) puede ser por los reactivos utilizados. Si no tienen pureza del 100%, si están hidratados con X moléculas de agua (cosa que hay que tener en cuenta en el peso molecular) o si la diferencia es pequeña, que se deba a errores de arrastre de decimales a lo largo de toda la ecuación.

      Obviamente, como dices, si el ácido es más que la base, el pH bajará. Y si es al contrario, subirá.

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    4. disculpa, no entiendo como llegar desde la parte del 0,631 a 0,613 mol/L, esta bien? a mi el log de 0,2 me da 0,689...

      me puedes ayudar, porfis

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    5. Hola FuShI,

      A ver, porque me pierdo yo. No sería el log de 0.2, sino el antilog de -0.2 al despejar. Eso da 0.631.
      Quédate con que 0.631 [AH] + [AH] = la molaridad que quieres y despeja [AH]
      Una vez lo tengas, ya solo tienes que sustituir [AH] por lo que te haya dado en esta fórmula:
      [AH]+[A]=la molaridad que quieres
      y tendrás la de [A]

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  3. y si quiero preparrar un buffer a ph 5.2, como le hago?

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    1. Con esta misma ecuación teniendo en cuenta que tienes que poner 5,2 en pH (en vez de 7 como viene aquí) y el pKa del buffer correspondiente. Si me hablas de tampón fosfato potásico, solo sería sustituir el valor de pH.

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  4. Hola buenos días:

    He revisado tu cálculo y aparentemente todo va bien. Sin embargo y como dice Anónimo en el primer comentario, el pH que se logra mezclando las cantidades que tu refieres es aproximadamente de 6.5, a pesar de que los cálculos matemáticamente estan bien. No es error de pesada, no es error de sustancia ni nada, ya lo he elaborado 5 veces y todas me ha dado el mismo pH. ¿Tienes una explicación para este hecho? Gracias.

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    1. Hola.

      Como le he contestado por ahí arriba a la misma cuestión, no te puedo decir exactamente a qué puede deberse esa diferencia. Descartamos error de pesada entonces. Nos quedan los reactivos. Te has fijado en la pureza de los reactivos y el peso molecular? ¿están hidratados? ¿has tenido eso en cuenta para los cálculos? A veces, es una tontería de nada. ¿el pHmetro es fiable? ¿está recién calibrado? ¿las soluciones de calibración están bien?
      Sinceramente no se me ocurre otro motivo por el que te pueda pasar. A mí no me ocurre y en mi entorno al menos, no veo que nadie haya tenido esas diferencias de pH.

      Como te digo, la otra forma, es combinar las dos soluciones que vienen en algunos manuales y libros para que prepares por separado. Pero en realidad se basa en el mismo principio.
      Depende de para qué estés usando ese buffer, pero también te digo que de 6.5 a 7 no hay mucha diferencia de pH y cuando se trata de un pH fisiológico del medio que sea suele ser variable dentro de un rango.

      Un saludo.

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    2. los errores mas frecuentes a la hora de preparar un buffer es el no tomar la pureza de cada una de las sales constituyentes de dicho buffer, ademas de la calidad del agua con la que se prepara, la calibracion de la balanza analitica y del potenciometro, el uso de piperas volumetricas asi como de matraces aforados, tal como lo menciona Amara, el no tomar en cuenta demasiadas decimales o el hacerlo, representa una variacion en el pH final. Ahora bien, esta bien estipulado que si la solucion buffer que se quiere preparar no esta exactamente en el pH como se ha calculado, se pueden hacer ajustes con hidroxido de sodio o acido clorhidrico segun sea necesario. ademas es importante saber el poder de amortiguamiento de la solucion buffer que se va a preparar y esto te lo da la concentracion del mismo es decir la Molaridad de cada uno de los constituyentes de la solucion buffer, esto definira la cantidad de hidroxido de sodio o acido clorhidrico necesario adicionar para ajustar el pH deseado.

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  5. El agua de dilución es una solución que se prepara para realizar a nivel de laboratorio la prueba de la demanda bioquímica de oxígeno (DBO5) y estimar la cantidad de materia orgánica que puede ser oxidada por los microorganismos. Sin embargo es una solución especial que requiere de cierta cantidad de nutrientes y que su pH se conserve en un rango entre 6.5 y 8.5 unidades. Para ello esta solución debe tener un comportamiento del tipo amortiguador, donde se emplea un sistema fosfato, que además aporta el fósforo necesario para que los microorganismos logren mantenerse en el medio. Entonces si se necesita preparar 2 L de agua de dilución a una concentración de 0.5 M y un pH de 7, ¿qué cantidades se requieren pesar de KH2PO4 (fosfato monobásico de potasio) y K2HPO4 (fosfato dibásico de potasio)?

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    1. Tienes la ecuación en este post. Sustituye los datos de molaridad manteniendo el volumen de 1 L y los gramos que te dé, los multiplicas por dos para 2 L.

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  6. Hola, no sé si me contestarás ya que la entrada es antigua pero yo lo intento. No entiendo de qué depende la molaridad. Necesito hacer un tampón de fosfato sódico de ph 7, y por tanto tengo que calcular la concentración de cada especie, es decir mi incógnita son los gramos que necesito. De que depende que sea 1M o 50 mM?? En que influye eso sí lo único que me interesa es el pH? Como se la relación que necesito de esa molaridad si solo me han dicho que prepare un buffer pH 7?? Muchas gracias

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    1. Hola Ana.
      En el tampón fosfato sódico pH7 que tienes que preparar, tienes que saber a la fuerza a qué concentración lo necesitas. 50 mM, 1M... lo que sea. Si no sabes eso, no podrás prepararlo. Aunque te interese el pH, la concentración es importante. Imagina, no es lo mismo añadir una cucharada de azúcar a un vaso de agua que 30 cucharadas.
      Tiene que haber algún dato que te haga saber esa molaridad. Si no te lo han dicho explícitamente quizá ponga algo del tipo *usar la molaridad de la tabla X* No sé, algo.

      Mira bien o pregúntalo. Una vez lo sepas, es fácil.
      Un saludo.

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    2. Ana Belen la molaridad de una solucion buffer esta dada por el poder de amortiguamiento que quieras experimentar en dicho buffer, de tal manera que si las variaciones de pH en el medio en el que va actuar la solucion buffer son minimas entonces la molaridad o concentracion del buffer sera meno y si dichas variaciones de pH son elevadas, entonces la concentracion del buffer sera mayor.

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  7. Buen día, entonces si quiero preparar una solución buffer de fosfato de potasio monobásico 50mM y pH 4.5, entonces puedo usar los mismos datos de pKa, pero cambiando los datos de pH y molaridad deseada ¿cierto?

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    1. Cierto. Debes poner la molaridad en Molar (no milimolar) y sustituir el pH.
      El tampón que quieres preparar es muy ácido, no? Para qué lo vas a usar?

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  8. hola, no entendi como saca el valor del fosfato dibasico de fosfato, gracias.

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    1. Hola Anónimo.

      ¿Qué valor? ¿El peso molecular o los gramos finales que hay que añadir?

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  9. Como puedo preparar un Amortiguador de fosfato de potasio pH=7.3
    Suplementado con 20mM de edta, 2mM MgCl2, 30 mM KCl y 2℅ de BSA. Estoy muy confundida, sería muy buena su ayuda.

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    1. Tienes los datos incompletos. Para preparar el buffer necesitas saber a qué concentración lo quieres. No lo dices.

      Y respecto al resto de cálculos, usa la fórmula de la molaridad (M= número de moles/ volumen). Es algo bastante básico.

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  10. Tengo una pregunta, a partir de fosfato potásico y fosfato dipotásico puede calcularlo perfectamente de la misma forma que tu arriba. Pero tengo que preparar el tampón usando unicamente fosfato monosódico y o bien HCl o bien NaOH. ¿Cómo se haría?

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    1. Me falta información. Lo que me dices no me cuadra. El tampón fosfato sódico, sí. Se prepararía así (teniendo en cuenta su pKa) pero el "o bien HCl o bien NaOH" no entiendo. Suena más a que son los reactivos con los que se baja o se sube el pH de la solución (respectivamente). No se puede elegir entre uno y otro de forma arbitraria. Es un ácido y una base, no tienen nada que ver entre sí

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  11. Hola necesito preparar una soluciones de buffer de fosfato de potasio a un pH 7.2 y otro a un pH de 8.6 con un Molaridad 0.1. Tengo fosfato de potasio monobásico (KH2PO4) con un peso molecular de 136.09 y el fosfato de potasio dibásico (K2HPO4) con un peso molecular de 174.18, me podrías ayudar a hacer el cálculo? De antemano gracias

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    1. Ok. Te voy a ayudar pero lo vas a hacer tú. Son dos buffers a distinto pH, así que primero uno y luego el otro igual. Tienes todos los datos y el pKa es 7.2 para los dos. Por tanto,

      Buffer A:
      pH 7.2
      pKa 7.2
      M =0.1

      Buffer B:
      pH 8.6
      pKa 7.2
      M= 0.1

      Vuelve a la fórmula de arriba, la del post y sustituye por tus valores.
      Céntrate en

      pH = pKa + log [A]/[AH] donde
      A es el fosfato dipotásico (174.18 gr/mol)
      AH es el fosfato monopotásico (136.09 gr/mol)

      Ve haciendo y me cuentas :-)

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  12. Estuve leyendo este Post, y la variación de pH del Buffer depende del pH del agua que se está empleado para fabricar el Buffer. Revisar el tema en el libro de bioquímica de Lenhinger. de preferencia emplear agua desionizada.

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  13. Hola,

    trabajo en una empresa que prepara reactivos para analizar vinos y queríamos empezar a fabricar tampones de calibración de ph de 4.00 y 7.00, me valdrían estos cálculos para ambos tampones? y la estabilidad del patrón es larga? (1/2 años) la idea sería fabricarlos y venderlos a nuestros clientes así que tiene que ser un producto fiable. muchas gracias de antemano

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    1. Hola Ana,
      Yo diría que no. Esos cálculos están pensados para preparar una solución tamponadora formada por un ácido y una base, pero en realidad no sé cómo se preparan los tampones de calibración de un pHmetro (ya vienen preparados de fábrica...)

      Siento no poder ayudarte más. Quizá esta página te pueda dar algo de luz
      http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=5033

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    2. gracias! echare un vistazo a ver si nos sirve de algo

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    3. madre mía, te están pagando, y vienes a preguntar eso tan básico a un blog... es indignante, pero te contestaré.

      Tampón a pH 4: para que quieres un tampón fosfato a ese pH? tendrás que usar otro compuesto con un pKa cercano a 4... no ves que a pH 4 la capacidad de tu tampón fosfato para contrarrestar ácido va a ser reducida? a no ser que lo que quieras hacer es contrarrestar acidez y no mantener el pH ante variaciones de pH tanto a ácido como a básico.

      pH final de la mezcla: obviamente los cálculos que ha realizado Amara son al diluir con agua con a pH 7, lo cual no es del todo cierto puesto que el agua destilada es ligeramente ácida, luego tendrías que ajustar a tu pH deseado.

      Mezcla de reactivos: puedes pesar solo uno de los reactivos a la concentración deseada, la reacción es de equilibrio químico, por lo tanto no tienes porqué pesar ambos componentes si el valor de pH que quieres obtener es entorno a su pKa. Se suele ver por ahí como preparar disoluciones tampón a pH tal y concentración tal y usarse 2 disoluciones de ambos componentes... pero eso es por hacerlo práctico en un laboratorio en el que necesites hacer para vrios experimentos disoluciones tampón a pH tal, y concentración tal, para ello preparan 2 disoluciones de partida, haces la mezcla basándote en tablas de mezcla o calculas tu la proporción y ya está, obtienes el pH que quieres (sin tener porqué ajustar) a la concentración determinada... no preparas 20.000 disoluciones distintas con pH tal y concentración tal pesando los dos componentes... es por ser más práctico.

      tampones de calibración: hay muchas empresas que llevan años de experiencia vendiéndolos, no me parece normal que una empresa que tiene una trabajadora que se dedica esa idea de mercado, venga a un blog a preguntar estas cosas... Vamos, o mientes o te han enchufado en la empresa, porque anda que no hay gente en el paro que conoce bien lo que preguntas.

      PD: Amara, los cálculos son correcto y claros, gracias por publicarlo y servir de recordatorio del procedimiento del cálculo.

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  14. Muchas gracias por su colaboración con los distintos profesionales que realizamos ese tipo de cálculos

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  15. Hola Amara.
    Necesito preparar una solución antiséptica con hipoclorito.Entiendo que añadiendo el tampón a dicha solución podría mantener el PH de tal manera que no dañara los tejidos vivos.En este caso sería mantener el PH a 10.5 para estabilizar la solución de hipoclorito.
    Gracias

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    1. Hola Javier,

      No entiendo. Entiendo que la solución antiséptica sería de hipoclorito sódico, probablemente al 0,1%% pero no entiendo por qué mezclarla con un buffer. ¿Cual es el uso que le vas a dar a la solución antiséptica? Más que antiséptico, creo que se usa como desinfectante...
      Te dejo esta página que habla de antisépticos y desinfectantes. De todos, yo solo uso el etanol al 70% para superficies y manos.
      http://www.funlarguia.org.ar/Herramientas/Guia-de-Prevencion-de-Infecciones-Intra-Hospitalarias/Uso-de-Antisepticos-y-Desinfectantes

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  16. Buenas,solo espero que me ayude porque no entiendo muy bien este problema. ¿Qué volúmenes necesitaría de NaH2PO4 0.2M y Na2HPO4 0.2M para preparar 10 mL de un amortiguador fosfato. ph=7, sabiendo que su pK=7.2

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  17. Hola Amara.
    El fosfato monopotásico hidrogenado lo puedo conseguir en tiendas de productos agrícolas pero no sé dónde puedo encontrar el dipotásico.
    Podrías indicarme.Gracias.

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    1. Hola Javier,
      No lo venden en el mismo sitio que el monopotásico? Mmmm pues no sé decirte, la verdad. He hecho una pequeña búsqueda en varias webs y tampoco lo veo. Noto que los fertilizantes ya vienen preparados "ready to use" más que los compuestos químicos por separado.
      Quizá preguntando en esas tiendas donde sí está el monopotásico te puedan decir algo...

      Siento no poder ayudarte más.

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  18. Hola Amara,

    Me parece muy claro el cálculo que haces, solo que necesito preparar 200 ml de tampón, en que punto tengo que tener en cuenta el volumen final? Entiendo que los 0.631 mol/L en este punto yo tendría que dividir los 0.631/0.2 L y obtendría el número de moles para después multiplicarlo por su PM y obtener los gramos a pesar. Se hace de esta manera?

    Muchas gracias

    Un saludo

    Raquel

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    1. Hola Raquel,

      Puedes hacerlo de dos formas:
      1. Como tú dices, solo que no sería dividir 0.631/0.2 sino hacer una regla de tres. Si hay 0.631 moles en un litro, habrá X moles en 0.2 l. (fíjate que no es dividir, sino multiplicar 0.631 por 0.2)

      2. Hacerlo todo igual que en la chuleta hasta el final. Todas las ecuaciones parten de la base de trabajar con molaridad como unidad de medida y esto es por definición moles por un litro. Puedes arrastrar esto hasta el final y cuando tengas los gramos (de la forma que tú describes en tu comentario) por litro, haces una regla de tres para 0.2 litros o para el volumen que tengas que preparar.

      Como prefieras. ¡Suerte!

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  19. Hola
    Genial tu explicación. Muy clara. Pero, qué utilizar si quiero un tampón para una solución orgánica? Para un aceite.
    Muchas gracias.

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    1. No te entiendo muy bien. Qué tipo de solución? Puedes concretar más?

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  20. hola Amara con un grupo de laboratorio queríamos pedirte ayuda con unos cálculos, debemos preparar un buffer de fosfato de sodio, solución tampón de fosfato sódico (20 mM) a pH 6,5 conteniendo NaCl 150 mM, KCl 25 mM, MgCl _ {2} 3 mM y EDTA 4 mM, Se añadirá inhibidor de proteasa (PMSF 1 mM).

    Ademas debemos realizar otras soluciones como por ejemplo:
    solución de KCl 50 mM a pH 6,4
    tampón de fosfato de sodio 20 mM a pH 6,0 que debe contener NaCl 0,6 M (pH 6,0)
    Queremos saber como obtener los gramajes de cada uno de los reactivos a utilizar

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    1. Hola.

      A ver. Por lo que veo es un buffer fosfato como el descrito en el post (con sodio en vez de potasio) y otros reactivos que hay que añadir posteriormente.
      En el caso 1:

      Prepara el buffer y después vais añadiendo el NaCl, KCl, MgCl... en la cantidad adecuada. Para ello, tenéis que aplicar la fórmula general de la molaridad.
      M = (m/Pmol)/ V
      donde M es la concentración (molaridad) en moles, M (si está en mM, pasadla a M)
      Pmol es el peso molecular del compuesto
      V es el volumen, en litros.
      Despejando esta ecuación, los gramos que hay que echar vendrían como m = MxVxPmol

      Caso 2 (solución KCl 50mM a pH 6.4):
      Siguiendo la ecuación anterior, calculad los gramos que hay que poner. Enrasais con agua hasta el volumen final (o algo menos) y medid el pH a 6.4. Como no sé si saldrá más alto o más bajo, lo podéis bajar con HCl o subir con KOH.

      Caso 3 (buffer con NaCl 0.6 M)
      Igual. Después de preparar el buffer, calculad los gramos de NaCl y medid pH.

      Espero que aunque algo tarde, todavía llegue a tiempo el comentario.
      Suerte!

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  21. Hola Amara! Quería saber si existe diferencia si utilizo los fosfatos hidrogenados con moléculas de agua. En ese caso la ecuación sería diferente?

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    1. Hola!
      Yo diría que no. Únicamente tienes que tenerlo en cuenta en el peso molecular, a la hora de saber los gr de producto que tienes que añadir. Los productos hidratados, tienen como es normal un peso molecular distinto que los no hidratados y según el número de moléculas de agua que lleve.

      Un saludo!

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  22. hola amara, tengo una consulta necesito preparar un litro de 50 mM buffer fosfato de potasio (pH7) que contenga 1mM EDTA y 1% de polivinilpirrolidona, entiendo los calculos para la parte de los fosfatos pero ya cuando hay que agregar estos 2 componentes en el mismo buffer me quedo con la confusión de como prepararlo.

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    1. Hola!

      Efectivamente, los cálculos son idénticos a los del post así que prepáralo añadiendo la misma cantidad de cada producto.
      Una vez hecho, solo tienes que añadir el EDTA y la PVP.

      Para ello, sigue esta ecuación:
      M = (m/Pmol)/ V
      donde M es la concentración (molaridad) en moles, M (al ser 1mM quedaría 0.001M)
      Pmol es el peso molecular del compuesto (ojo. Depende del EDTA que uses. Normal, disódico, ferrico... esto cambia el peso molecular. Fíjate cuál es)
      V es el volumen, en litros (en tu caso sería 1)
      Despejando esta ecuación, los gramos que hay que echar vendrían como m = MxVxPmol

      Respecto a al PVP (y en general cualquier producto que venga reflejado como %) se refiere a gr/100 ml por lo tanto si el tuyo es al 1% tendrás que poner 1 gr en 100 ml o lo que es igual, 10 gr por litro.

      Suerte!

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  23. Hola yo necesito elaborar los buffer de NA2HPO4 Y K2HPO4, A pH 6,8, para luego diluir tripsina para lograr el bandeo G, con estas drogas no se cuando el lo que tengo que pesar pues tengo los valores para los monobasico de sodio y potasio. Mi pregunya, puedo usar estos dibasicos, y en que proporcion?, soy genetista y no recuerdo nada de los calculos.

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  24. Hola.

    Me hablas de dos buffers distintos. Uno es el buffer fosfato sódico y el otro es fosfato potásico.
    Para preparar el buffer de fosfato potásico, no tienes más que seguir las instrucciones del post poniendo el pH que quieres y la concentración del tampón.

    Para el buffer de fosfato sódico, es igual. Solo cambia el peso molecular de los compuestos. Aquí tienes otra "chuleta" específica para este tampón, pero vamos, es exactamente igual, con el mismo pKa.
    http://mural.uv.es/llanes/preparacion.html

    Hazlo exactamente igual y solo cambia el pH y los pesos moleculares. Pon la molaridad que necesites. El resultado será para un litro, pero una vez obtenidos los gramos para un litro, calculas para el volumen que necesites preparar.

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  25. Hola Amara una pregunta
    si quiero preparar una solución buffer de ph 5.o cambiaría el pka? y si es así qué valor tendría? gracias y saludos

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    1. Hola Amii,
      El pKa cambia si el pH va a ser muy ácido, más o menos neutro o básico. A un pH de 5 yo seguiría usando el mismo pKa de 7.2
      En esta tabla puedes verlo https://www.chromacademy.com/images/common-buffers-table.jpg

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  26. Buenas tardes.Creo que no se debería usar tampones con PKa con más diferencia de 1 del PH deseado.

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    1. Gracias por tu aportación Javier. La verdad es que no estaba segura.

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  27. hola perdoname tengo 2 dudas...
    porque en un momento el valor es 0.631 y luego pasa a ser 0,613 ?
    la otra duda es que el valor de la solución de 1M y la de 50mm no me coincide
    el valor en la de 50mm debería ser igual a dividir la de 1M en 10 y luego a la mitad?

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    1. Hola botanic,

      El 0.631 viene de hacer el antilog de -0.2 (de la ecuación inmediatamente anterior), mientras que el 0.613 viene de despejar la ecuación:

      0.631 [AH] + [AH] = 1
      1.631 [AH] = 1 (porque has sumado el 0.631 + 1 que antecede a [AH]
      al despejar [AH] te queda 0.613 (porque has dividido 1:1.631)

      Respecto a lo otro, los cálculos están hechos para una molaridad de 1M. Puedes poner la molaridad que quieras pero siempre en Molar. Es decir, si necesitas una molaridad de 50 mM, tendrás que poner en la ecuación 0.05 M.
      Si haces todos los cálculos poniendo 0.05 M ya te saldrán los gramos que tienes que poner para preparar un tampón con esa molaridad.

      Otra opción es que lo prepares a 1M y una vez hecho, hagas la dilución que necesites para otras ocasiones.
      Suerte!

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  28. Buenas noches...si quiero preparar la solucion en 100 ml como lo puedo hacer?

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    1. Hola María Guadalupe.

      A ver... si aplicas todos los datos de la ecuación y de la chuletilla del post, solo tendrías que hacer una regla de tres porque esos datos son para 1 litro.

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  29. Saludos, puedo usar los mismos compuesto para pH 10 y sabes si me sirve como buffer para determinar dureza?

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    1. Hola Liszeth.
      Los compuestos serán los mismos, pero no las cantidades. Con pH 10 cambiará también el pKa. Lo demás, es cuestión de hacer lo mismo teniendo estos dos datos en cuenta.

      Respecto a lo de la dureza, lo siento. Ahí no te puedo ayudar. No lo sé.

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  30. Hola buen dia.
    mi pregunta es la solución reguladora de fosfato solo se puede hacer con Fosfato de Potasio Monobasico? o tambien con Fosfato de Sodio Monobasico?

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    1. Hola Martha.
      El tampón fosfato lo puedes hacer con el potásico o con el sódico. Este post habla del tampón de fosfato potásico usando tanto el monopotásico como el dibásico, pero si lo haces con sódico tendrás que usar el monosódico y el disódico teniendo en cuenta los pesos moleculares de ambos. El resto es el mismo procedimiento.

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    2. Monopotásico como dipotásico, quería decir

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    3. Lo que pasa es que estoy haciendo un procedimiento con Solución reguladora de fosfato pero se utiliza sodio monobasico y tengo tengo potacio monobasico

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    4. Pues no sé. La forma correcta sería usando ambos productos del mismo tipo, es lo lógico. Quizá haciéndolo como dices no influya si tienen el mismo pKa, pero no sería lo normal.

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  31. Hola buenas tardes...
    En caso de realizar mis cálculos y no obtener el pH deseado...¿Cómo puedo corregir esto?

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    1. Hola.
      No te entiendo. El pH lo sabes de antemano. Haciendo los cálculos, lo que sabrás es la cantidad de producto que tienes que poner de cada uno para un volumen, pKa, molaridad y pH determinado. Haciendo esa ecuación, no tienes que volver a medir pH.

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  32. Buenas tardes, agradezco este tipo de blogs es bastante útil, mi propósito para utilizar este tampón es usarlo para estabilizar una solucion de diclofenaco sodico a pH 7.4, pero al adicionar HCl o NaOH el pH baja o sube bruscamente, existe alguna otra forma de estabilizar el pH, tal vez con otro tampon? Help me

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  33. Se requiere la preparación de una solución Buffer fosfato pH 4.5 conteniendo un 0,25% de Laurilsulfato de Sodio (como volumen final se requieren 6 litros), el cual se utiliza como medio de disolución de un producto farmacéutico, mi consulta es necesario el uso de ambos reactivos?, porque en la FDA me dicen las composiciones de las soluciones para pH deseados pero únicamente partiendo de un volumen de una solución de buffer fosfato 0.2M, pero cuando requiero de la preparación del buffer fosfato pH 4.5 no hay ninguna información al respecto...Saludos Cordiales espero tu respuesta

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    1. Los buffers suelen tener un Pka próximo al pH con el que van a trabajar. Tendrías que consultar en alguna tabla cuál es el Pka más cercano a ese pH y aplicar ambos valores en la ecuación.

      Me pillas fuera ahora y no puedo mirar. El SDS se lo añades cuando ya esté preparado, es independiente.

      Si tienes dudas, vuelve. Suerte!

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  34. Hola Amara!

    Muchas gracias por tu chuleta es muy util. Mi duda quizas ya haya sido preguntada, pero la hago por si acaso. Quieor preparar el mismo tampon que tu pero a pH 7,5. He seguido tus calculos pero al hacer el antilogaritmo de o,3 (resultante de pH-pKa --> 7,5-7,2) me da 2, por lo que el resto de ecuaciones me da resultados en negativo. ¿Que he podido hacer mal? ¿Cambia el pKa del fosfato?

    Muchas gracias!

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    1. Hola!
      Hasta donde me cuentas, lo estás haciendo bien. El pKa para un pH de 7.5 sigue siendo 7.2 (el rango de pH donde trabaja este pKa es de 6.2-8.2) y efectivamente, el antilog de 0.3 es 2.
      Repasa los cálculos posteriores. Mira a ver qué Molaridad estás poniendo.

      Yo lo estoy haciendo para una Molaridad de 1 y me sale (si no me equivoco):
      0.33 moles/litro de [AH] KH2PO4
      0.67 moles/litro de [A-] K2HPO4

      No te puede dar negativo. Míralo a ver.

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    2. Tienes toda la razon, me habia comido una operacion. Muchisimas gracias, me has sido de una grandisima ayuda.

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    3. jejejeje ¡¡me alegra haberte podido ayudar!!

      Un saludo

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  35. hola Amara, en tus cálculos no entiendo como pasaste de (A)=0.631*(AH) de allí hacia 0.631*(AH)+(AH)= 1; Que paso con (A)? podrias por favor explicarme, gracias me ha servio mucho tu post

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    1. Hola Mauricio.

      Ok. En nuestro ejemplo, la solución debe tener una molaridad de 1.
      [A-] + [AH] = 1 (porque ese 1 es nuestra molaridad). Esa suma debe ser nuestra molaridad.

      Hemos llegado a saber que (A)=0.631*(AH), por tanto, lo siguiente que hemos hecho es sustituir el valor de (A) según lo que nos ha dado en la suma de arriba.
      No sé si me estoy explicando jejeje.
      Al despejar finalmente el (AH) tendremos su valor y sabiendo de nuevo que AH + A deben ser 1, ya solo nos queda despejar A.

      Si no lo entiendes, te lo vuelvo a explicar.

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  36. Hola Amara, ohh Ya claro reemplazas el valor en la suma, gracias me sirvió muchísimo, mira otra duda, porque cuando pasas el logaritmo al otro lado de la igualdad el 0,2 queda negativo, pues en la fórmula el logaritmo es positivo, gracias

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    1. Porque el 7,2 que está a la derecha en la ecuación está sumando. Si lo llevamos al otro término de la ecuación (a la izquierda), pasa restando. Por tanto,
      7-7,2= - 0.2
      El siguiente paso es despejar el log y se hace poniendo en la calculadora el "antilog de - 0.2". Así es como sale 0.631

      Un placer 😊

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    1. Ostras! Pues no me he visto nunca en una de esas 🙄
      A ver si esto te puede ayudar
      https://drive.google.com/file/d/18OEyqbHg7bqz_zCaDHCYTfBpQVSmwAnU/view?usp=drivesdk

      Gracias por tus palabras!!

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    2. Amara, muchas gracias. Ahora he estado mirando pero no hay nada. En algunas webs pone ke se puede preparar con fosfato monopotásico y ajustar después el ph con el hidróxido de potasio, pero si soy sincero, no tengo ni idea jajaja si se te ocurriese algo te agradecería una mano. De nuevo gracias.
      Natxo L.

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    3. Amara, buenas noches, te agradecería si pudieses borrar mis comentarios preguntándote ya que he tenido problemas con mi jefe que lo ha leído. Muchas gracias por todo, y la próxima te escribiré desde el anonimato jeje un saludo

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  38. Buenas tardes amara al igual que a varios yo trabaje con el buffer fosfato de sodio, estaban ambas sales hidratadas y realice los cálculos para un buffer de 7.2 tengo entendido que si tenemos la misma concentración de sales, el pH del buffer sería igual al pka porque aplicas log de 1 que termina siendo cero. pero cuando utilice los mismos volumenes suponiendo concentraciones iguales el ph terminó siendo 6,5, es verdad que se puede ajustar ya que son dos soluciones independiente y tengo que agregar mayor cantidad en este caso de base para llegar al 7,2 pero cual crees que sería la causa de esta diferencia. Tal vez lo mismo que se ha explicado anteriormente. Saludos

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    1. Lo que dices es verdad. Si la concentración de sales es la misma, el pKa sería igual al pH, pero lo que no me cuadra es que utilizaste los mismos volúmenes suponiendo concentraciones iguales. Ahí me pierdo.
      En cualquier caso, es verdad que el pH puede variar un poco pero si lo haces con esta ecuación y siguiendo el desarrollo, es fiable. Me refiero, a que utilices los gramos de cada uno de los compuestos que te hayan dado y el volumen, el que hayas puesto en la ecuación.

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  39. Hola, Amara. Para preparar una solución buffer a partir de cualquier fosfato y con pH de 2 hasta 10 solamente tengo que sustituir el pKa que se asemeje a los pH que yo quiero, cierto?. Tengo esta tabla que le compartiste a alguien más y ahí indica el rango de pKa.
    https://www.chromacademy.com/images/common-buffers-table.jpg

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  40. Hola Amara, quiero preparar una disolución tampón de KH2PO4 a pH 6. He consultado las tablas de pKa pero para pH 6 no entraría en los rangos. El pKa de 7,20 sería entre 6,20-8,20. ¿Tendría que usar ese valor?

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